Análise de um transposon de Anticarsia gemmatalis (Lepidóptera

54º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 54º Congresso Brasileiro de Genética • 16 a 19 de setembro de 2008
Bahia Othon Palace Hotel • Salvador • BA • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 978-85-89109-06-2
Análise de um transposon de Anticarsia
gemmatalis (Lepidóptera: Noctuidae)
Nunes, JF; Carpes, MP; Ribeiro, BM
Departamento de Biologia Celular, Instituto de Ciências Biológicas, UNB, Brasília, DF, Brasil
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Palavras-chave: Baculovírus, transposon
Os transposons, ou elementos transponíveis, são seqüências de DNA capazes de se moverem no genoma tanto por via
DNA, pela ação da enzima Transposase quanto por via RNA, sendo estes relacionados aos retrovírus. Durante uma
infecção de uma célula por um vírus de DNA, um transposon celular ativo pode ser inserido no genoma do vírus,
gerando ou não fenótipos distintos ao do vírus selvagem, dessa forma, esses vírus, assim como os transposons, podem
ser isolados e estudados. O transposon Tid (transposable iap disruptor) foi encontrado no genoma do baculovírus
Anticarsia gemmatalis multiple nucleopolyhedrovirus (AgMNPV) em 1999 durante a construção de um recombinante
viral em células de Anticarsia gemmatalis (UF-LAG-286) e foi isolado por ter gerado um fenótipo viral incapaz de
bloquear a apoptose celular. Esse transposon, que se move via DNA, foi localizado interrompendo o gene inibidor
de apoptose 3 (iap-3) do vírus AgMNPV e a sua seqüência obtida. Esse transposon possui 2.500 pb e apresenta duas
regiões invertidas e entre as mesmas uma ORF de 1638 pb codificando a enzima Transposase. Esse transposon foi
também localizado em outras duas linhagens de células de inseto derivadas de Spodoptera frugiperda (IPLB-Sf21-AE)
e Trichoplusia ni (BTI-Tn5B1-4), respectivamente. O presente estudo, tem como objetivo, o isolamento de células e
vírus contendo genes exógenos através de um sistema binário com o transposon Tid. Três plasmídeos ajudantes foram
construídos com os genes das transposases do tipo Tid das linhagens celulares IPLB-Sf21-AE, BTI-Tn5B1-4 e UFLAG-286 sob o comando do promotor de Drosophila melanogaster hsp70. Os plasmídeos doadores foram construídos
contendo as regiões esquerda e direita do transposon e entre elas o cassete do promotor hsp70 com o gene da proteína
enhanced green fluorescent protein (EGFP) e o cassete do promotor da fase precoce de baculovírus ie-1 com o gene da
proteína puromicina acetiltransferase (Pac), separadamente. Sistemas binários de transfecção foram formados com os
plasmídeos de transferência dos genes reporteres e os plasmídeos ajudantes separadamente; estes foram transfectados
em células BTI-Tn5B1-4, após 72 h as células transfectadas com o plasmídeo contendo o gene egfp foram analisadas
em citometria de fluxo e microscopia de fluorescência apresentando um aumento na expressão de EGFP em relação ao
controle; as células transfectadas com o plasmídeo contendo o gene Pac foram tratadas com puromicina e analisadas
em miscroscopia de luz. Foi realizado também ensaios de co-transfecção com os sistemas binários com o vírus
AgMNPV, após 72 h o sobrenadante foi coletado e utilizado para infecção de novas células BTI-Tn5B1-4 que foram
posteriormente analisadas em microscopia de luz, revelando expressão de EGFP. As células transfectadas expressando
os genes exógenos, assim como os vírus, estão sendo isolados para posterior análises de transposição Os experimentos
revelaram uma possível atividade de transposição.
Apoio financeiro: CAPES, CNPq, PRONEX, FAPDF, FINATEC.
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