título do resumo

EFEITOS DA LEDTERAPIA NO TESTÍCULO DE RATOS TRATADOS COM
CICLOFOSFAMIDA
Renata Fernandes Sanches; Solange de Paula Ramos
[email protected]
Universidade Estadual de Londrina/ Centro de Ciências Biológicas/
Departamento de Histologia
Área e sub-área do conhecimento: Morfologia – Histologia
Palavras-chave:
germinativas.
Ledterapia;
Ciclofosfamida;
Descamação
de
células
Resumo
A Ciclofosfamida é um agente alquilante utilizado amplamente como um
fármaco anticancerígeno. O efeito citotóxico da Ciclofosfamida tem como alvo
as células de divisão constante. Recursos terapêuticos, como a fototerapia por
meio do diodo emissor de luz ou LASER de baixa potência, apresentam uma
série de efeitos biológico, tais como o aumento da taxa de proliferação celular e
redução da inflamação. Este estudo tem como principal objetivo analisar os
efeitos preventivos da LEDterapia nos testículos de ratos Wistar tratados com
Ciclofosfamida, em relação a sua integridade morfológica. Foram utilizados
vinte e quatro ratos Wistar machos, divididos em quatro grupos: CON (controle
negativo); COL (controle LEDterapia); COD (controle droga) e DL (droga +
LEDterapia). O grupo CON não passou por nenhum procedimento, o grupo
COL passou por duas sessões de fototerapia. O grupo COD foi submetido a
única aplicação de Ciclofosfamida (200 mg/kg), via intraperitoneal, dois dias
antes à eutanásia e o grupo DL recebeu ciclofosfamida e LEDterapia. Dois dias
após o tratamento com Ciclofosfamida, os animais foram mortos e os testículos
foram fixados, incluídos em parafina, corados em Hematoxilina e Eosina e
analisados por microscopia de luz. Os grupos foram comparados com teste de
Kruskal-Wallis e de Dunn, ou teste exato de Fisher, considerando P <0.05. Os
resultados não demosntraram efeito da fototerapia na maturação da linhagem
espermatogênica nos grupos COD e DL. A fototerapia diminuiu
significativamente a freqüência de descamação epitelial e edema induzida pela
Ciclofosfamida. Concluímos que a fototerapia inibiu parcialmente a lesão
testicular induzida por Ciclofosfamida.
Introdução e objetivo
A Ciclofosfamida é um agente alquilante utilizado amplamente como um
fármaco anticancerígeno, bem como uma droga imunossupressora (Gurtoo et
al., 1981; Colvin, 1999; Selvakumar et al., 2006a; b). É um composto
biologicamente inativo que requer ativação metabólica hepática para exercer
sua ação farmacológica. A ciclofosfamida é metabolizada pelo citocromo P450-
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oxidase
mitocondrial
e
produz
a
4-hidroxiciclofosfamida
que,
subsequentemente, sofre uma degradação espontânea em mostarda de
fosforamida e acroleína (Gurtoo et al., 1981; Colvin, 1999). O efeito citotóxico
da Ciclofosfamida tem como alvo principal as células de divisão constante
(Colvin, 1999). Vários autores mostraram que a Ciclofosfamida induz lesões
nas membranas mitocondriais, proteínas, ácidos nucleicos, e membrana
lisossomal (Colvin, 1999). As células da linhagem espermatogênica são
suscetíveis aos efeitos nocivos da Ciclofosfamida, tendo sido observada lesão
dos túbulos seminíferos em pacientes submetidos a tratamento e em modelos
experimentais em animais de laboratório (Selvakumar et al., 2006b; a; Ceribasi
et al., 2010; Ramos et al., 2013). A renovação constante das células
germinativas da linhagem espermatogênicas, citotoxidade sobre as células de
Sertoli, além do comprometimento da maturação das células de Leyding, são
observadas após a administração da droga (Ceribasi et al., 2010; Liu et al.,
2012; Ramos et al., 2013). Recursos terapêuticos, como a fototerapia por meio
de diodos emissores de luz (Lightemitting diode – LED) ou LASER (Light
Amplification of Stimulation of Energy Radiation) de baixa potência, apresentam
uma série de efeitos biológico, tais como o aumento da taxa de proliferação
celular, analgesia, redução da inflamação e aceleram o processo de reparação
tecidual (Pereira et al., 2002; Vinck et al., 2005; Camargo et al., 2012; Serafim
et al., 2012; Fonseca et al., 2013). Esse estudo tem por objetivo avaliar os
possíveis efeitos protetores da aplicação da LEDterapia a 940 nm sobre lesões
provocados por estresse oxidativo induzido pela Ciclofosfamida em testículos
de ratos Wistar.
Procedimentos metodológicos
Foram utilizados vinte e quatro ratos Wistar machos, com aproximadamente
300g de peso, obtidos no Biotério Central da Universidade Estadual de
Londrina – CCB UEL. Os procedimentos experimentais foram realizados no
Departamento de Histologia, onde os animais foram mantidos em gaiolas
coletivas, em temperatura de 22°C a 24°C e ciclo de claro/escuro de 12 horas.
Foi fornecida ração normocalórica NUVILAB® e água potável à vontade. Os
animais foram divididos em quatro grupos: CON (controle negativo); COL
(controle led); COD (controle droga) e DL (droga led) com seis indivíduos em
cada grupo.Grupo controle negativo (CON): Os animais não passaram por
nenhum procedimento, permanecendo no biotério até o dia da eutanásia.
Grupo controle + LEDterapia (COL): Animais submetidos a LEDterapia por dois
dias consecutivos, antes da eutanásia. Grupo controle Droga (COD): Os
animais receberam uma dose única de Ciclofosfamida por via intraperitoneal
(200 mg kg-1).Grupo Droga + LEDterapia (DL): animais foram tratados com
Ciclofosfamida e submetidos a LEDterapia imediatamente após o tratamento e
24 horas após. A aplicação do LED foi realizada dois dias antes da eutanásia
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dos grupos experimentais COL e DL, na região dos testículos com o
equipamento posicionado a 90° da superfície da pele e a uma distancia de 1
cm da região irradiada durante quatro minutos. A densidade de energia foi
4J/cm2, com densidade de potências de 1mW/cm 2, com dose total de 4J,
distribuídos em 1cm2 sobre cada testículo. Para realizar o procedimento, os
animais foram anestesiados com uma solução de Cloridrato de Cetamina
(50mg/kg) e Xilazina (10mg/kg), via intraperitoneal. Para realizar o
procedimento de extração dos testículos, os animais foram eutanasiados com
overdose da solução anestésica, os testículos retirados e lavados em solução
salina e imediatamente pesados. O material foi fixado em solução de Bouin
aquosa, durante 24 horas, desidratado em solução de álcool etílico a 70%, 90%
e álcool absoluto. A seguir o material foi diafanizado em xilol, e incluído em
parafina histológica. Foram realizados cortes de 9 µm em micrótomo e fixados
em lâminas de vidro, para coloração por soluções de hematoxilina/eosina. Os
cortes foram analisados em microscopia de luz com sistema de captura de
imagens Motican 3.0 (Motic Company, Xiamen, China) e software Motic Image
Plus 2.0 (Motic, Xiamen, China) para avaliação da integridade dos tubos
seminíferos.
Resultados e discussão
O principal resultado do estudo indica que a. maturação da linhagem
espermatogênica é inibida precocemente pela ciclofosfamida, mas este efeito
colateral não pode ser inibido ou atenuado por efeito da fototerapia No entanto,
a diminuição da descamação de células sugere que houve uma menor
freqüência de células mortas precocemente. Além disso, a redução do edema
entre as células germinativas sugere que os eventos inflamatórios podem ter
sido atenuados por ação da fototerapia.
Conclusão
Apesar da ocorrência de edema e descamação de células germinativas, a
fototerapia atuou inibindo a ocorrência dessas lesões nos túbulos seminíferos.
No presente estudo, a fototerapia não preveniu o atraso no desenvolvimento da
linhagem espermatogênica nos animais tratados com Ciclofosfamida.
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