Estudo da lesão do DNA pelo fármaco dipirona na presença de

Sociedade Brasileira de Química (SBQ)
Estudo da lesão do DNA pelo fármaco dipirona na presença de cobre(II)
Bruna C. Roriz (IC) e Horacio D. Moya (PQ) ([email protected]).
Faculdade de Medicina da Fundação do ABC (FMABC) - CEPES (Centro de Estudos, Pesquisa, Prevenção e
Tratamento em Saúde da FMABC) - Av. Lauro Gomes, 2000 - Santo André - SP - Brasil – C.P. 106 - CEP 09060-650
Palavras Chave: DNA, lesão, dipirona, cobre.
80
Estudos in vitro mostraram que alguns fármacos
(ex.: procarbazine1 e AZT2) podem causar lesão ao
DNA na presença de íons metálicos de transição
(Mn+). Entre os mecanismos propostos, acredita-se
que esses fármacos possam reduzir Mn+ a M(n-1)+,
que, na presença de H2O2, leva à formação de
radicais HO os quais induzem a lesão ao DNA3.
No presente estudo verificou-se que a lesão ao
DNA, in vitro, ocorre na presença de dipirona sódica
e Cu2+, e é proporcional a concentração do fármaco.
60
Resultados e Discussão
A técnica de eletroforese (gel de agarose 0,8%
m/v com 1,8 µM de brometo de etídio) foi utilizada
para avaliar a quebra das fitas do DNA pUC-19
através da conversão da forma nativa supercoiled
(SC) para a forma open circular (OC). Todos os
estudos foram conduzidos em solução saturada de
ar e T = (25,0±1,0) oC.
DNA pUC19 (0,5 g/L, Fermentas), dipirona
sódica, NaDip, (Sigma), soluções estoque de
Cu(NO3)2 0,20 M (preparada a partir de fio de Cu
99,99 % Sigma), Na2Cu[EDTA] 0,75 mM (Fluka
AG), Neocuproina (NC) 3,0 mM (Sigma) e tampão
TBE pH = 8,0 (Tris 90 mM, Borato 90 mM e EDTA 2
mM) foram usadas nos experimentos.
As Figuras 1 e 2 mostram que a lesão ao DNA na
presença de Cu2+ (concentração fixa) aumenta com
a concentração de NaDip (linhas 3 a 8). Observouse que a lesão só ocorre segundo a ordem de
adição: DNA + Cu2+ + NaDip.
% (OC)
Introdução
20
0
Figura 2. Variação na quebra (% OC) de DNA
pUC19 na presença de NaDip. Cu2+ 100 M. pH =
7,5. Médias e desvios de triplicatas.
Experimentos revelaram que quando Cu2+ (100
M) é adicionado como Cu[EDTA]2+ (log  = 18,8)4
não se observa lesão (dados não mostrados). A
Tabela I mostra que adicionando Cu2+ junto com NC
(ligante especifico para Cu+) a lesão ocorre, mas é
reprimida devido a formação de Cu(NC)2+ (log 2 =
19,1)4. Isso indica que o ciclo redox Cu2+/Cu+ é
necessário ao processo de lesão ao DNA.
Tabela I. % (OC) de quebras no DNA.
2
3
4
5
6
7
8
Figura 1. Lesão ao DNA pUC19 na presença de
Cu2+ e NaDip. pH = 7,5. Linha (1): DNA 5ng/L;
Linha (2): DNA 5ng/L + Cu2+ 100 M; Linhas (3) a
(8): DNA 5ng/L + Cu2+ 100 M + NaDip 80; 200,
300, 400, 500 e 600 µM, respectivamente.
a
36 Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Química
[NaDip]/M
80
200
300
400
500
600
%(OC)
312
332
39 3
421
431
441
* Cu 100 M, NC 200 M; pH = 7,5.
2+
Conclusões
A técnica de eletroforese mostrou-se adequada
para avaliar a lesão ao DNA na presença de NaDip
e Cu2+, porém, não é possível obter informação
sobre o sítio da lesão.
Agradecimentos
FAPESP e PIBIC (CNPq)
____________________
1
1
100 200 300 400 500 600
NaDip (M)
OC
SC
40
Ogawa, K.; Hiraku, Y.; Oikawa, S.; Murata, M.; Sugimura, Y.;
Kawamura, J.; Kawanishi, S.; Mutation Research. 2003, 539, 145-155.
2
Iwamoto, T.; Hiraku, Y.; Oikawa, S.; Mizutani, H.; Kojima, M.;
Kawanishi, S.; Archives of Biochemistry and Biophysics. 2003, 416,
155-163.
3
Frelon, S.; Douki, T.; Favier, A.; Cadet, J.; Chem. Res. Toxicol. 2003,
16, 191-197
4
Smith, R. M.; Martell, A. E. NIST Critically Selected Stability
Constants of Metal Complexes Database 2004, 46; Version 8.0.