Estudo da expressão de genes de virulência regulados pelo

56º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 56º Congresso Brasileiro de Genética • 14 a 17 de setembro de 2010
Casa Grande Hotel Resort • Guarujá • SP • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 978-85-89109-06-2
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Estudo da expressão de genes de virulência regulados
pelo repressor fur em Klebsiella pneumoniae
Ferraz, LFC1,a; Leite, RO1; Mota, LP1; Stuchi, LP;1; Gomes, AEI1; Ribeiro, ML2; Pedrazzoli Jr, J2; Vicentini, R3
Laboratório de Pesquisa, Universidade São Francisco, Bragança Paulista, SP
Laboratório de Biologia Molecular, UNIFAG, Universidade São Francisco, Bragança Paulista, SP
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Centro de Biologia Molecular e Engenharia Genética, Universidade Estadual de Campinas, SP.
a
[email protected]
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Palavras-chaves: Klebsiella pneumoniae, regulador transcricional Fur, genes de virulência, regulação gênica.
Klebsiella pneumoniae é uma bactéria Gram negativa que causa uma variedade de infecções, tais como pneumonia,
meningite e septicemia. Assim como na maioria das bactérias patogênicas, a capacidade de K. pneumoniae em
captar ferro constitui-se em um importante fator determinante de sua patogenicidade. Em muitas bactérias, o
sistema de homeostase de ferro é regulado pelo repressor transcricional Fur. Em ambientes ricos em ferro o regulador
Fur forma um complexo com íon ferroso e este complexo se liga a seqüências regulatórias, chamadas boxes Fur,
localizadas na região promotora dos genes alvos, levando à repressão da transcrição destes genes. Este trabalho
teve por objetivo a identificação e caracterização de genes associados à virulência em Klebsiella pneumoniae cuja
expressão é regulada por Fur. Neste sentido, uma matriz consenso construída a partir de sítios regulatórios de Fur
de outras bactérias foi utilizada para identificar prováveis boxes Fur na região promotora de genes de virulência. O
papel do repressor Fur na regulação da expressão desses genes foi investigado por meio do ensaio FURTA, no qual
células de E. coli linhagem H1717 transformadas com vetores contendo os prováveis boxes Fur foram plaqueadas
em meio de cultura MacConkey contendo ferro (100µM de FeSO4). Foram identificados boxes Fur em genes com
possíveis implicações na patogenicidade de K. pneumoniae, tais como genes que codificam: sistema de captação de
ferro mediado por sideróforos dos tipos catecolato (genes fepD, entC e ybiL) e hidroxamato (gene fhuA), resistência
ao estresse oxidativo (gene sitA), biossíntese de fímbrias (gene fimZ), bombas de efluxo de drogas (gene hlyD) e
no próprio gene que codifica para o repressor Fur (gene fur). Todos os boxes Fur identificados foram validados
por meio do ensaio FURTA. O papel do repressor Fur na regulação da expressão desses genes foi investigado por
meio de PCR em tempo real a partir de células de K. pneumoniae cultivadas em meio de cultura contendo ferro
(FeSO4) e em meio com privação de ferro (contendo o quelante dipiridil). O presente trabalho revelou que Fur
é um regulador global que em Klebsiella pneumoniae controla a expressão não apenas de genes envolvidos na
homeostase de ferro, mas também de genes que determinam a patogenicidade nesta bactéria, tais como genes
do mecanismo de captação de ferro, formação de biofilme, resposta ao estresse oxidativo e resistência a drogas.
Apoio Financeiro: FAPESP.