detecção de bactérias produtoras de histamina utilizando

DETECÇÃO DE BACTÉRIAS PRODUTORAS DE HISTAMINA
UTILIZANDO TÉCNICAS DE PCR E SONDAS DE DNA
Rita Torres Alves, Ana Teia dos Santos e Maria Fernanda Martins
DITVPP - Departamento de Inovação Tecnológica e Valorização dos Produtos da Pesca
Av. Brasília 1449-006 LISBOA
Recebido em 20.11.2000
Aceite em 1.02.2001
RESUMO
Este trabalho consistiu na aplicação de métodos que possibilitam a detecção de fragmentos de DNA específicos,
correspondentes a genes de bactérias produtoras de histamina frequentemente presentes em conservas de peixe.
Primeiro, quantificou-se o teor em histamina de diversas amostras de pescado através da técnica de HPLC.
Posteriormente, extraiu-se o DNA das amostras que continham histamina e realizaram-se amplificações desse
DNA com os iniciadores específicos para o gene hdcA da histidina-descarboxilase.
Os conjuntos de iniciadores utilizados, CL1/CL2, JV16HC/JV17HC e CL1/JV17HC, amplificaram os produtos
com 150 pb, 370 pb e 500 pb, respectivamente. Obtiveram-se também fragmentos não esperados (100 pb, 150 pb
e 250 pb) amplificados por JV16HC/JV17HC.
Alguns fragmentos amplificados foram sequenciados automaticamente, apresentado uma elevada homologia
com o gene hdcA de Clostridium perfringens.
A partir da estirpe pura de C. perfringens fez-se uma sonda de DNA que foi hibridada com os fragmentos de
DNA amplificados a partir das amostras contaminadas. As bandas de hibridação foram depois detectadas por
colorimetria revelando que as amostras estavam contaminadas por C. perfringens.
Palavras chave : bactérias produtoras de histamina, conservas de peixe, DNA
ABSTRACT
Title: Detection of histamine producing bacteria, using PCR techniques and DNA probes
This work consisted in the application of methods enabling the detection of DNA specific fragments,
corresponding to genes synthesised by histamine producing bacteria frequently present in canned fish. First, the
level of histamine of several fish product samples was quantified by HPLC technique. After, the DNA of the
samples containing histamine was isolated and amplified with hdcA histidine-decarboxilase gene specific
primers.
The primer sets used, CL1/CL2, JV16HC/JV17HC and CL1/JV17HC, amplified 150 bp, 370 bp and 500 bp
products respectively. Non expected fragments (100 bp, 150 bp and 250 bp) were also amplified by
JV16HC/JV17HC.
Some amplified fragments were sequenced automatically, presenting high homologies with Clostridium
perfringens hdcA gene.
A DNA probe from C. perfringens pure strain was elaborated and hybridized with the DNA fragments amplified
from the contaminated samples. The hybridization blots were then detected by colorimetry revealing that the
samples were contaminated by C. perfringens.
Keywords : histamine producing bacteria, canned fish, DNA
REFERÊNCIA BIBLIOGRÁFICA
ALVES, R.T.; SANTOS, A.T.; MARTINS, M.F. 2000. Detecção de Bactérias Produtoras de Histamina
utilizando Técnicas de PCR e Sondas de DNA. Relat. Cient. Téc. Inst. Invest. Pescas Mar, nº67, 18 p.