instrução de uso - Doles Reagentes

Outros testes refletem a lesão hepatocelular na
hepatite viral aguda:
• Aminotransferases (alanina aminotransferase
/ALT e a aspartato aminotransferase /AST),
previamente denominadas transaminases
(respectivamente, TGP e TGO) geralmente
encontram-se acima de 500 U.I./L.
• Bilirrubina Total se eleva, podendo alcançar
níveis entre 5 e 20 mg%.
• Fosfatase Alcalina geralmente está aumentada.
• Leucograma geralmente revela neutropenia
com linfocitose relativa.
Na hepatite crônica, a biópsia hepática definirá o
diagnóstico histológico e permitirá avaliação da
atividade da doença.
CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO
Sensibilidade e Especificidade
O teste foi realizado com um total de 250 amostras,
sendo 150 amostras sabidamente positivas e 100
negativas. Foi realizado o teste comparativo com
um kit comercial de Eletroquimioluminescência.
Durante os estudos realizados observou-se uma
sensibilidade de 100% e Especificidade de 99%
para o método.
Repetitividade
Foram realizados ensaios de 10 replicas para cada
uma das 04 amostras estudadas. As amostras
eram divididas em negativa, positiva baixo nível,
positiva médio nível e positiva alto nível. Houve
correta identificação em mais de 99% das vezes.
Reprodutibilidade
Foram realizados 10 ensaios independentes
para cada uma das 04 amostras estudadas. As
amostras eram divididas em negativa, positiva
baixo nível, positiva médio nível e positiva alto
nível. Houve correta identificação em mais de
99% das vezes.
BIBLIOGRAFIA CONSULTADA
• Bonino, F.; Hoyer, B.: nelson, J. et al.: Hepatitis
B virus DNA in the sera of HBsAg carries: a
maker of active hepatites B virus replication in
the liver. Hepatology, 1: 386-91,1981.
• Clement, F.; Dewint, P.; Leroux-Roels, G.
Evaluation of a new rapid test for the combined
detection of hepatitis B virus surface antigen
and hepatitis B virus e antigen. Journal of
4/4
SAC: (62) 3269 0000 (Grande Goiânia)
SAC: 0800 644 6433 (Demais localidades)
Clinical Microbiology 40(12): 4603-4606. 2002.
• Kryger, P.; Aldershvile, J.; Mathiesen, L.R.;
Nielsen, J.O.: Acute type B hepatitis among
HbsAg negative patients detected by anti-HBc
IgM. Hepatology, 2(1): 50-3,1982.
• Sjogren, M.H.: Serologic diagnostics of viral
epatitis. Gastroenterol Clin North Am, 23(3):
457-77, 1994.
• Strauss, E.; Saez-Alquezar, A.; Takeda, A. et
al.: Acute hepatitis B in a patient previously
positive for antibody to surface antigen (antiHbs) determined by radioimmunoassay. Case
report and review of the literature. Rev. Med.
Trop. São Paulo, 27(5):258-63, 1985.
• Tsang, T.K.; Blei, AT.; O’Reilly, D.J.; Decker,
R.: Clinical significance of concurrent hepatitis
B surface and antibody positivity. Dig Dis Sci,
31(6): 620-4,1986.
• http://www.aids.gov.br/assistencia/manual_
dst/hepatite.htm. Acesso em 03/02/2010.
• Doles: dados de arquivo.
TERMOS E CONDIÇÕES DE GARANTIA DA
QUALIDADE DO PRODUTO
As garantias do fabricante ao consumidor seguem
estritamente as relacionadas na Lei no 8.078, de
11 de setembro de 1.990 - Código de Defesa do
Consumidor.
Os reagentes que compõem este sistema para
diagnóstico são garantidos na sua performance,
reprodutibilidade e qualidade até a data de
vencimento.
Os produtos que apresentarem problemas
técnicos comprovados serão substituídos,
sem ônus para o consumidor.
Doles Reag. Equip. para Laboratórios Ltda.
CNPJ: 01.085.513/0001-05
Rodovia BR 153, Km 493, Lt.07
Chácara Retiro, Conjunto Palmares.
CEP: 74775-027
Goiânia - GO – Brasil
e-mail: [email protected]
M.S.: n0 10231810107
Revisão: 03 (04/2011)
HBsAg
FINALIDADE
Kit para determinação qualitativa do antígeno
de superfície do vírus da hepatite B (HBsAg),
por método imunocromatográfico, usando
anticorpos mono e policlonais imobilizados na
membrana para identificação seletiva de HBsAg
em amostras de soro.
Somente para uso diagnóstico in vitro.
PRINCÍPIO
Os antígenos de superfície HBsAg presentes na
amostra ligam-se ao conjugado gamaglobulinacorante formando um complexo antígenoanticorpo. Este flui pela área adsorvente da
placa-teste indo se ligar aos anticorpos antiHBsAg na área de positividade da reação (T),
determinando o surgimento de uma banda
colorida rosa-clara. Na ausência dos antígenos
de superfície HBsAg não haverá o aparecimento
da banda colorida na área T.
A mistura da reação continua a fluir atingindo
a área controle (C). O conjugado não ligado
ao antígeno une-se aos reagentes desta
área produzindo uma banda colorida rosa,
d e m o n s t ra n d o q u e o s r e a g e n t e s e s t ã o
funcionando corretamente.
METODOLOGIA
Imunocromatográfico
REAGENTE E APRESENTAÇÃO
PLACA-TESTE: Composta por uma base plástica
onde é acondicionado o filtro de amostra (fibra
de vidro), uma base conjugada (fibra de vidro)
contendo uma combinação de anticorpos
monoclonais e policlonais de fase sólida em
forma de sanduíche e duas áreas, uma seletiva
para detecção de níveis elevados do antígeno de
superfície da hepatite B, e a segunda onde existe
um conjunto de reagentes que representam o
controle de qualidade da placa teste.
Todo material montado nesta base plástica é
acondicionado em um cassete plástico embalado
em envelope contendo dissecante.
Ref.A
Placa-teste: 10 unidades
Ref.B
Placa-teste: 20 unidades
Ref.C
Placa-teste: 40 unidades
SAC: (62) 3269 0000 (Grande Goiânia)
SAC: 0800 644 6433 (Demais localidades)
TESTE RÁPIDO
EQUIPAMENTOS E MATERIAIS NECESSÁRIOS
NÃO FORNECIDOS
Recipientes para descarte do material
Pipeta semi automática
ARMAZENAMENTO E ESTABILIDADE DOS
REAGENTES
PLACA-TESTE: Conservar entre 2 e 30ºC. Não
congelar. As placas são sensíveis a umidade, não
abrir o envelope até que se tenha alcançado a
temperatura ambiente para evitar condensação.
Estável até a data de vencimento indicada no
rótulo do produto, obedecidas as condições de
armazenamento.
CUIDADOS E PRECAUÇÕES COM O USO DOS
REAGENTES
Todos os reagentes são somente para uso
diagnóstico in vitro. Seu manuseio deve ser
cuidadoso, evitando-se o contato com pele e
mucosas. Em caso de contaminação acidental,
lavar a área afetada em água corrente. O
descarte do material utilizado deverá ser feito
obedecendo-se aos critérios de biossegurança
estabelecidos pelo laboratório, de acordo com
as normas locais, estaduais ou federais.
AMOSTRA
Soro límpido. Amostra utilizada deve estar
isenta de hemólise. Utilizar preferencialmente
amostras recém colhidas. Se as amostras não
forem testadas imediatamente, devem ser
refrigeradas à temperatura de 2 a 8 ° C. Para
períodos de armazenamento superior a três
dias, o congelamento (-20ºC) é recomendado.
Amostras congeladas devem ser descongeladas
gradualmente e homogeneizadas ao atingir
a temperatura ambiente. Evitar repetidos
congelamentos e descongelamentos. Na
ocorrência desta situação há possibilidade de
falsos resultados.
Não utilizar amostras de plasma e sangue
total. A presença de anticoagulantes na amostra
poderá interferir na ação do conjugado, o que
causará interferência no ensaio.
Não utilizar amostras diluídas devido a
possibilidade de falsos negativos.
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PROCEDIMENTO TÉCNICO
As placas e amostras devem estar
equilibradas com a temperatura ambiente
antes do início do teste.
1. Retirar a placa teste do envelope e colocá-la
sobre uma superfície plana.
2. Com o auxílio de uma pipeta semiautomática
dispensar 100mm L de soro na cavidade da amostra
da placa teste ( )
3. A leitura dever ser feita entre 10 e 20 minutos,
após a adição do soro.
4. Qualquer banda de coloração que surja
após 30minutos não tem valor diagnóstico.
INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS
O método detecta o antígeno de superfície HbsAg
em amostras com concentração do vírus da
hepatite B a partir de 10UI/mL.
Negativo
Haverá a formação de uma banda rosa na área
do controle (C).
Positivo
Haverá a formação de duas bandas, ambas rosa.
Sendo uma na área de teste (T) e a outra na
área do controle (C).
Nota: a formação de bandas teste e controle,
com diferenças de intensidade de coloração,
não afeta o desempenho do teste.
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SAC: (62) 3269 0000 (Grande Goiânia)
SAC: 0800 644 6433 (Demais localidades)
Inválido
O teste será considerado inválido se não ocorrer
a formação de banda na área controle.
LIMITAÇÕES DO SISTEMA
• Para se obter ótimo desempenho do sistema,
é necessário que o procedimento técnico seja
rigorosamente seguido conforme instruções
de uso. Qualquer alteração poderá levar a
resultados errôneos.
• Antes do início do testes, a placa teste e a
amostra devem estar equilibradas com a
temperatura ambiente.
• A leitura não deve ser feita após 20 minutos.
• O produto é indicado para determinar a fase
aguda da Hepatite B. É um teste de triagem
utilizado com a finalidade de detectar a
presença do antígeno da Hepatite B. A
ocorrência repetida de resultados positivos
para este teste é presumível da presença
do vírus na amostra. Em se tratando de um
método de triagem os resultados deverão ser
confirmados por testes mais específicos – vide
item Diagnóstico Laboratorial.
CONTROLE DA QUALIDADE DO SISTEMA
• Ler cuidadosamente as instruções de uso antes
de realizar o teste.
• A data de validade corresponde ao último dia
do mês assinalado na etiqueta do envelope da
placa-teste e da caixa do kit.
• Deve-se evitar expor o kit a temperaturas
elevadas, bem como diretamente ao sol.
• Não congelar a placa-teste, pois isto causará
deterioração irreversível.
• Deixar os reagentes adquirirem a temperatura
ambiente antes de iniciar os testes.
• Não usar componentes do kit após a data de
validade.
• Utilizar as Boas Práticas de Laboratório (BPLs)
na conservação, manuseio e descarte dos
materiais.
• Não substituir componentes deste kit com o
de outros fabricantes, nem usar componentes
de lotes e códigos diferentes.
• Quando realizado o teste, a formação da
banda controle na placa teste indica o perfeito
desempenho do produto e do procedimento
técnico.
• É aconselhável associar um sistema de
controle de qualidade usando amostras
conhecidas, sendo uma negativa e outra com
concentração do vírus da hepatite B a partir
de 10UI/mL.
SIGNIFICADO CLÍNICO
A hepatite B é definida como inflamação do
fígado causada por uma infecção pelo Vírus da
Hepatite B (HBV), um vírus DNA, da família
Hepadnaviridae.
Os vírus da família Hepadnaviridae são
hepatotróficos. A sua multiplicação acontece no
núcleo da célula infectada, utilizando as enzimas
de replicação de DNA da própria célula humana.
A partícula viral ou virion do HBV é denominada
partícula de Dane podendo ser filamentosa ou
esférica. Possui um envelope bilipídico, onde
existe a proteína da membrana viral HBs (s
de surface: superfície). O capsídeo interno ao
envelope que protege o genoma e algumas cópias
de enzima transcriptase, reversa (necessária já
que as células humanas não a produzem), é
formado pela proteína HBc (c de core: capsídeo).
A infecção pelo HBV ocorre através de contato
sexual, oral, parenteral e uso comum de seringas
e agulhas.
No Brasil, estudos de prevalência do HBV
detectaram índice de infecção média de 8,0%
na região Amazônia legal, de 2,5% na região
Sudeste e de 1,0% na região Sul.
O período de incubação da Hepatite B aguda
situa-se entre 45 e 180 dias.
Nos pacientes sintomáticos, a hepatite B,
usualmente, evolui nas seguintes fases:
• Fase Prodrômica: sintomas inespecíficos de
anorexia, náuseas e vômitos, alterações do
olfato e paladar, cansaço, mal-estar, artralgia,
mialgias, cefaléia e febre baixa.
• Fase Ictérica: inicia-se após 5 a 10 dias da
fase prodrômica, caracterizando-se pela
redução de intensidade destes sintomas e
SAC: (62) 3269 0000 (Grande Goiânia)
SAC: 0800 644 6433 (Demais localidades)
ocorrência de icterícia. Colúria precede esta
fase por 2 ou 3 dias.
• Fase de Convalescença: a sintomatologia
desaparece gradativamente, geralmente em 2
a 12 semanas.
Na Hepatite B, durante o quadro de infecção
aguda, 60 - 70% dos pacientes exibem apenas
sintomas da fase prodrômica, se houver 100%
de recuperação, torna-se um portador.
O quadro clássico de hepatite B se manifesta
em 20 a 25% dos infectados. Destes há
uma recuperação completa em cerca de
99%. O restante (1%) evolui com quadro de
hepatite fulminante e óbito. Outros 5 -10% são
assintomáticos e caracterizados como portadores
sadios.
Aproximadamente 4 - 5% dos infectados podem
apresentar quadro de infecção persistente,
havendo a médio prazo recuperação total.
Uma fração destes pacientes (+/-15%) evolui
para hepatite crônica. Fração destes infectados
pode exibir um quadro terminal de cirrose.
Aproximadamente 10% destes cirróticos evoluem
para um quadro de carcinoma hepatocelular.
DIAGNÓSTICO LABORATORIAL
Realiza-se por meio dos marcadores sorológicos
do vírus da Hepatite B:
• Antígeno de Superfície da Hepatite B (HBsAg)
é o primeiro marcador a aparecer, geralmente
precede a hepatite clinicamente evidente, e
também está presente no portador crônico;
• Antígeno HBe (HBeAg) é detectado logo após
o aparecimento do HBsAg, sua presença indica
replicação viral ativa. Sua positividade por 8
a 12 semanas indica o desenvolvimento de
hepatite crônica B;
• Anticorpo contra o antígeno central da
Hepatite B tipo IgM (anti-HBc IgM) é um
marcador da replicação virótica, aparece no
início da hepatite clínica e pode ser o único
marcador sorológico do tipo agudo presente
em alguns pacientes. O paciente com Hepatite
B crônica pode apresentar o anti-HBc IgM
em baixa concentração no soro, não sendo
detectado nestas circunstâncias, de modo que
o resultado pode ser positivo na Hepatite B
aguda, e negativo, na Hepatite B crônica;
• Anticorpo superficial da Hepatite B (antiHBs)pode aparecer tardiamente na fase
convalescente, e sua presença indica imunidade.
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