Inserir o nome do Procedimento Operacional Padrão Página 1 de 4 POPBIO 001 Laboratório DOSAGEM DO ÁCIDO ÚRICO Revisão: 00 ÁCIDO ÚRICO-PP PRINCÍPIO DO TESTE O ácido úrico é oxidado pela uricase (UOD) em alantoína, gás carbônico e água oxigenada. Através de uma reação de copulação oxidativa catalisada pela peroxidase (POD), o peróxido de hidrogênio formado reage com o diclorofenolsulfonato (DCFS) e 4-aminoantipirina (4-AMP), produzindo uma antipirilquinonimina de cor vermelha. A absorbância do complexo formado, medida em 520 nm, é diretamente proporcional à concentração de ácido úrico da amostra. UOD Ác.Úrico O2 2H2O Alantoína CO2 H2O2 POD 4H2O Antipirilquinoneimina 2 H2O2 DCFS 4 AMP APLICAÇÃO CLÍNICA A dosagem do Ácido Úrico no sangue, urina e outros líquidos biológicos é empregada principalmente para avaliar doenças metabólicas genéticas (gota), doenças renais, e patologias como leucemias, linfomas, etc. Fatores como: sexo, peso, idade, raça, predisposição genética, diabetes, ingestão excessiva de álcool, determinados medicamentos, estão também relacionados com alterações nos níveis de ácido úrico sanguíneo. AMOSTRA Preparo do Paciente Colher sangue pela manhã após jejum de 8 horas, salvo orientações médicas. Amostras utilizadas Soro, plasma ou urina de 24 horas. Pode-se dosar também em líquidos amniótico ou sinovial. Estabilidade e armazenamento da amostra O analito é estável por 7 dias a 2-8 ºC. Volume ideal utilizado para análise (Definir o volume ideal a ser encaminhado para análise). Volume mínimo utilizado para análise (Definir o volume mínimo a ser encaminhado para análise). Critérios para rejeição da amostra Urina: quando constatar presença de ácido ascórbico. Fazer referência ao manual ou POP de coleta, separação e distribuição de material. REAGENTE UTILIZADO ÁCIDO ÚRICO PP CAT. 451 MS 80022230065 GOLD ANALISA DIAGNÓSTICA LTDA CNPJ – 03.142.794/0001-16 Av. Nossa Senhora de Fátima, 2363 Belo Horizonte – MG – Brasil Farmacêutico Responsável: José Gilmar Pereira Berto - CRF-MG 13421 Componentes do kit Conservar entre 2-8C. 1 Padrão 6,0 mg/dL - Contém 6,0 mg/dL de ácido úrico. 2.Reagente de Cor - Contém tampão fosfato 100 mmol/L pH 7,8; detergente 1,5 g/L, diclorofenolsulfonato 4,0 mmol/L, uricase 5 U/mL, ascorbato oxidase 5000 U/L, peroxidase 1 U/mL e 4-aminoantipirina 0,5 mmol/L. Cuidados e Precauções Especiais 1- O kit destina-se somente para uso diagnóstico in vitro. 2- Aplicar os cuidados habituais de segurança na manipulação dos reagentes e amostra biológica. Fazer referência ao manual ou POP de segurança. 3- Os reagentes utilizados em condições técnicas adequadas e armazenados nas condições especificadas são estáveis até a validade citada na embalagem. Inserir o nome do Laboratório Procedimento Operacional Padrão Página 2 de 4 POPBIO 001 DOSAGEM DO ÁCIDO ÚRICO Revisão: 00 4- O reagente uma vez usado, contém soro, plasma ou urina, eventualmente infectado, e deve ser tratado como material potencialmente infeccioso. Fazer o descarte em lugar apropriado. 5- Os reagentes não contêm substâncias perigosas nas quantidades reportadas. Em caso de vazamento acidental, lavar o local com água corrente. 6- Recomenda-se o uso de luvas descartáveis durante o manuseio das substâncias. Em caso de contato com os olhos ou pele, lavar abundantemente com água corrente. Em caso de ingestão, procurar atendimento médico. 7- Aconselhamos não pipetar diretamente do frasco Reagente de Cor (2) para evitar contaminação. 8- O Reagente de Cor poderá apresentar uma coloração rósea, mas isso não interferirá no resultado do teste. A leitura da absorbância do reagente branco deverá ser inferior a 0,200 durante toda a sua utilização ou até a expiração da data de validade do mesmo. EQUIPAMENTOS Procedimento Técnico Manual Banho-Maria a 37ºC Espectrofotômetro ou fotômetro para leituras em 520 nm (510-530) Pipetas automáticas Cronômetro Procedimento Técnico Automatizado Citar nome, modelo e o local onde se encontra o equipamento; Fazer referência ao manual ou POP para utilização do mesmo. Procedimento Técnico Alternativo Citar o equipamento alternativo e os procedimentos para medição dos ensaios. Indicar as possíveis diferenças quando os procedimentos manuais substituírem os procedimentos automatizados. PROCEDIMENTO Procedimento Manual 1- Deixar os reagentes e as amostras atingirem a temperatura ambiente ou a do banho-maria (37ºC), antes de realizar o teste. 2- Identificar 3 tubos de ensaio com "Branco", "Teste" e "Padrão" e proceder: Tubos Branco Teste Padrão Água deionizada 25 L Amostra 25 L Padrão (1) 25 L Reagente de Cor 1000 L 1000 L 1000 L 3- Misturar bem e incubar os tubos por 5 minutos em banho-maria a 37ºC. 4- Ler as absorbâncias (A) do Teste e do Padrão em 520 nm ou filtro verde (510-530), acertando o Zero com o Branco. 5- A cor é estável por 30 minutos. Dosagem em Amostras de Urina Homogeneizar a urina, separar 10ml, acertar o pH entre 7,0 e 9,0 com NaOH 5% e aquecer 10 minutos para dissolver os cristais de urato e ácido úrico. Diluir a amostra de urina 1:10 (0,1 mL de urina + 0,9 mL de água destilada ou deionizada). Seguir a técnica de análise descrita para o soro e multiplicar o resultado obtido por 10. Procedimento em Analisadores Automáticos Mencionar o manual ou POP para utilização do equipamento analítico. Anexar o guia de aplicação dos reagentes para o sistema automático. CÁLCULOS Ver Linearidade. Como a metodologia obedece à lei de Lambert-Beer, fazer os cálculos feitos com o Fator de Calibração (FC). Concentração do Padrão = Cp Concentração do Teste = Ct Absorbância Padrão = Ap Inserir o nome do Procedimento Operacional Padrão Página 3 de 4 POPBIO 001 Laboratório DOSAGEM DO ÁCIDO ÚRICO Revisão: 00 Absorbância do Teste = At Exemplo: Cp = 6,0 mg/dL Fc Ap = 0,190 At = 0,152 Cp 6,0 31,6 Ap 0,190 Ct = Fc x At = 31,6 x 0,152 = 4,8 mg/dL Dosagem de Ácido Úrico na Urina: mg/24 horas = mg/dL x volume Urinário de 24 h em mL 100 RESULTADOS Unidade de Medida mg/dL Fator de Conversão de Unidades (mg/dL para SI) mg/dL de Ácido Úrico x 59,5 = µmol/L de Ácido Úrico CONTROLE DA QUALIDADE Materiais Identificar os materiais de controle interno e externo da qualidade, citando fabricante e número de catálogo. Referenciar POP para limpeza e secagem dos materiais utilizados. Controle Interno Descrever a calibração periódica de pipetas, equipamentos utilizados, controle de temperatura ambiente e geladeiras para armazenamento dos kits. Citar a utilização de soros controles (nível normal –código --------- e patológico –código -------) nas análises realizadas juntamente com a freqüência da utilização dos mesmos. Descrever o procedimento de verificação de novos lotes de controles e reagentes. Citar POP para controle interno. Controle Externo Descrever os procedimentos utilizados nas avaliações de qualidade feitas por programas de comparação entre laboratórios ou outros controles de qualidade: PNCQ-SBAC e/ou PELM-SBPC Gerenciamento dos dados obtidos no Controle Interno e Externo Definir como os dados de controle são arquivados e gerenciados. Fazer referência ao manual ou POP de garantia da qualidade. VALORES DE REFERÊNCIA Soro Homens: 2,5 a 7,0 mg/dL = 149 a 416 mol/L Mulheres: 1,5 a 6,0 mg/dL = 89 a 357 mol/L Urina 250 a 750 mg/24 horas = 1,5 a 4,5 mmol/24 horas Líquido Sinovial 2,0 a 8,0 mg/dL Líquido Amniótico: Depende da Idade gestacional 15 semanas: 4,0 mg/dL 25 semanas: 5,7 mg/dL 40 semanas: 10,4 mg/dL Inserir o nome do Procedimento Operacional Padrão Laboratório Página 4 de 4 POPBIO 001 DOSAGEM DO ÁCIDO ÚRICO Revisão: 00 SIGNIFICADO CLÍNICO O ácido úrico é um metabólito das purinas, ácidos nucleicos e nucleoproteínas. Numerosas doenças, condições fisiológicas, alterações bioquímicas, fatores sociais e ambientais estão associados a elevações na concentração do urato plasmático. Valores aumentados: A hiperuricemia ocorre na maioria dos pacientes com gota, na insuficiência renal, leucemia, policitemia, mieloma múltiplo, intoxicação por chumbo, cetoacidose, nos tratamentos com citostáticos ou tiazídicos, na síndrome de Lesch-Nyhan, nas hiperuricemias idiopáticas. O aumento de urato está positivamente relacionado a hiperlipidemia, obesidade, aterosclerose, diabetes mellitus e hipertensão, embora os mecanismos destas alterações ainda não sejam bem compreendidos. Valores diminuídos: As causas da hipouricemia são pouco freqüentes, ocorrendo na síndrome de Fanconi, doença de Wilson e doenças malígnas como linfoma de Hodgkin e carcinoma broncogênico. Enquanto drogas como salicilatos, fenilbutazona aumentam a excreção de ácido úrico, outras como o alopurinol interfere na síntese, diminuindo assim sua concentração no sangue. VALORES CRÍTICOS Soro 12,0 mg/dL Incluir o procedimento a ser adotado diante de um resultado crítico. LINEARIDADE E LIMITE DE DETECÇÃO Linearidade A reação é linear até 25,0 mg/dL (1487 mol/L). Para valor acima de 25,0 mg/dL, diluir a amostra com NaCl 0,9 g%, realizar nova dosagem e multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluição empregado. Limite de detecção O limite de detecção do kit foi verificado no comprimento de onda de 520nm, sendo que a alteração mínima detectável foi de 0,02 mg/dL. O intervalo de medida vai de 0,02 mg/dL até 25 mg/dL. LIMITAÇÕES DO MÉTODO Os resultados deverão ser usados em conjunto com informações disponíveis da avaliação clínica e outros procedimentos diagnósticos. Interferências Ácido ascórbico, cafeína e teofilina podem elevar a concentração sérica de ácido úrico. Diversas drogas, como aspirina e outros antiinflamatórios, contrastes radiográficos, vitamina C e warfarin afetam a excreção de ácido úrico. O uso de diuréticos reduz a taxa de excreção de ácido úrico. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1234567- Barham D, Trinder P. Analist 1972;97:142-145. Burtis CA, Ashwood ER. Tietz Fundamento de Química Clínica, 4ª Ed - Guanabara Koogan SA; 1998. Duncan PH, Gochman N, Cooper T, Smith E, Sayze D ClinChem 1982;28:284-290. Elin RJ, Johnson E, Chesler R. Clin Chem 1982;28:2089. Fossati P, Prencipe L, Berti G Clin Chem 1980, 26:227-31. Inmetro - Boas Práticas de Laboratório Clínico e Listas de Verificação para Avaliação, Qualitymark ed., Rio de Janeiro, 1997. Kaplan A, Szabo LL, Opheim KE. Clinical Chemistry: Interpretation and Techniques. Philadelphia, Lea & Febiger, 1988:140143. 8Trinder P. Ann Clin Biochem, 1969;6:24. 9Westgard JO, Barry PL, Hunt MR. Clin Chem 1981; 27:493-501. 10- Ferraz MHC, Delgado RB - Valores de Referência para Exames Laboratoriais: Leão E, Corrêa EJ, Viana MB, Mota JAC Pediatria Ambulatorial 3ª Ed. Belo Horizonte, COOPMED, Belo Horizonte, 1988:837-848. 11- GOLD ANALISA: Informe Técnico do Produto. Nome Elaborado por: Aprovado por: Implantado por: Substitui POP: Revisado por: Revisado por: Revisado por: Desativado por: Razão: Assinatura Data ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ Inserir o nome do Laboratório Página 5 de 4 Procedimento Operacional Padrão POPBIO 001 DOSAGEM DO ÁCIDO ÚRICO Número Revisão: 00 Destino Cópias Revisão 05/16