Descrição histológica qualitativa de tumores em bolsa

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V Mostra de
Pesquisa da PósGraduação
Descrição histológica qualitativa de tumores em bolsa jugal de
hamster sírio dourado e padronização da avaliação
histomorfométrica.
Fernanda Lopes de Souza 1,2, Mariana Oliveira de Oliveira2, Marianne Brochado Nunes2, Maria
Antonieta Lopes de Souza 2, Léder Leal Xavier 1,2 (orientador)
1
Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular
2
Laboratório de Biologia Celular e Tecidual, FaBio, PUCRS
Resumo
Atualmente, o câncer é uma das causas mais comuns de morbidade e mortalidade,
onde a cada ano, no mundo, surgem 10 milhões de novos casos e 6 milhões de pessoas
morrem em decorrência dessa doença.
O câncer bucal de células escamosas é o oitavo tipo de câncer mais comum no mundo.
Modelos de tumores animais que imitam muito proximamente o câncer bucal humano
são importantes para elucidar os mecanismos da transformação neoplásica além de guiar a
prevenção e tratamento. O câncer bucal de células escamosas pode ser induzido em hamsters,
e esse é um dos sistemas melhor caracterizado para analisar o desenvolvimento de câncer
bucal de células escamosas.
Este trabalho faz parte de um projeto de pesquisa já aprovado pelo programa de PósGraduação em Biologia Celular e Molecular da PUCRS, pela Comissão Científica da
Faculdade de Biociências e encontra-se sob avaliação do Comitê de Ética para o Uso de
Animais da PUCRS. Portanto, como a parte experimental com animais necessita da aprovação
do CEUA-PUCRS, o material analisado foi obtido de trabalhos científicos prévios,
pertencentes ao acervo do Laboratório da PUCRS.
A análise qualitativa de imagens obtidas de tumores de bolsa jugal, corados com
hematoxilina e eosina teve o intuito de obter melhor caracterização histológica do tumor para
estudos futuros.
V Mostra de Pesquisa da Pós-Graduação – PUCRS, 2010
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Foram utilizadas 24 imagens com aumentos de 40 e 100 vezes (40X e 100X)
digitalizadas, de tumores de bolsa jugal, obtidas em microscópio Olympus BX50 com sistema
de captura Leica IM50.
No estudo histológico foi observado que nas bolsas jugais não expostas ao
carcinógenio, o epitélio tem aspecto normal, sem hiperplasias, com suas camadas bem
delimitadas e uma discreta camada de queratina. O tecido conjuntivo apresenta-se íntegro,
sem infiltrado inflamatório e sem hiperplasia vascular.
Já nas lâminas que foram expostas ao carcinógeno, é evidente a hiperplasia epitelial,
sendo facilmente identificadas pérolas de queratina, células com morfologia alterada e o
infiltrado linfo-plasmocitário invadindo tanto tecido epitelial quanto o tecido conjuntivo. Há
um aumento de vascularização no tecido conjuntivo, edema e presença de vasos em
neoformação.
Foram utilizadas lâminas histológicas de tumores de bolsas jugais de hamster e a
técnica imunoistoquímica para tirosina hidroxilase, reveladas com diaminobenzidina. Dez
imagens (40X) digitalizadas de tumores de bolsa jugal e 5 imagens de imunohistoquímica
(40X), obtidas em microscópio Olympus BX-50 com sistema de captura Leica IM50. As
imagens foram apresentadas no formato RGB, JPEG e foram processadas no software Image
Pro Plus 6.0. Com o uso de linguagem Visual Basic C foram definidas as macros e algoritmos
necessários para captura de imagem, armazenamento, conversão para Gray scale (0-255) e
mensuração dos seguintes parâmetros: densidade vascular, área luminal vascular,
porcentagem de diferentes tecidos e análise semi-quantitativa da intensidade de reação
histoquímica. O material foi analisado com os métodos de contagem de pontos, método de
delineamento e por densitometria óptica regional e celular. Os resultados obtidos com os
protocolos de contagem de pontos e delineamento foram comparados estatisticamente com o
uso do teste de correlação de Pearson no software SPSS 11.0. Invariavelmente o uso de
macros e algoritmos reduziu significativamente tempo de processamento da imagem. Os
resultados obtidos com o método de delineamento apresentam uma correlação ótima com os
obtidos com o método de contagem de pontos, maior que 0.9, contudo o método de contagem
de pontos reduziu em cerca de três vezes o tempo de execução da tarefa. Deste modo,
encontra-se padronizado o protocolo de avaliação histomorfométrica de tumores de bolsa
jugal, e outros tumores, no software Image Pro Plus 6.0, para avaliação do material
histológico obtido em projetos futuros.
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