Slide 1 - Stoa Social

Graziele Fonseca de Sousa
Gene ERBB25
Codifica o receptor tipo
2 do fator de crescimento
epidérmico
humano(HER2)
Cerca 20% -30% das
mulheres com câncer de
mama apresentam
amplificação de ERBB2
HER2 biomarcador para o câncer de
mama
A tirosina quinase desempenha um papel
fundamental na regulação dos processos
como o crescimento celular, sobrevivência e
diferenciação.
http://www.roche.pt/sites-tematicos/her2/index.cfm/her2_e_o_cancro/o-que-e-o-her2/
Trastuzumab
A Trastuzumab é potencialmente nocivo para os pacientes sem a produção de HER2, porque ele utiliza
o mesmo receptor encontrado em tecido cardíaco não patológico, podendo causar cardiotoxicidade e
em alguns casos, morte.
Porque utilizar os ensaios de FISH e
IHQ?
• São métodos comumente utilizados para a avaliação de superprodução da
proteína ou amplificação do gene em relação as características
morfológicas tumorais;
• Ao contrário das técnicas moleculares, não requer homogeneização do
tumor;
 No entanto os resultados de aproximadamente 20% dos testes de HER2
realizados no departamentos de patologia nos locais de tratamento primário
mostraram-se incorretos quando as amostras eram reavaliadas em um alto
volume no laboratório central.
Objetivos
 Gerar a produção de materiais de referência para estudar
a utilização do IHQ e FISH para quantificação e
caracterização das linhas celulares SKBR-3 e MCF-7 de
carcinoma de mama HER2 em termos de produção e
amplificação de ERBB2, respectivamente, e para
examinar a adequação destas linhas celulares como
controles para os teste de HER2.
Materiais e Métodos
 Linhas celulares de carcinoma de mama SK-BR-3 e MCF-7;
 Anticorpo anti-HER2 IgY de frango;
 Anticorpo monoclonal anti-HER2 IgG de camundongo;
 Anticorpos secundários, anti-IgY biotinilada (Genway Biotech) e anticorpo anti-
IgG biotinilada (Ventana);
 Sonda de DNA para o gene ERBB2 foi a BAC;
 Os anticorpos e a sonda foram detectados por microscopia de fluorescência com
estreptavidina-Qdot 655 (Invitrogen) como o reagente de detecção final de
afinidade.
Imunohistoquímica ( IHQ)
O anticorpo conjugado a uma
enzima, pode catalisar uma reação
que produzirá coloração.
Hibridização Fluorescente In Situ (FISH)
http://www.biomedicinapadrao.com/2012/03/hibridizacao-fluorescente-in-situ-fish.html
Resultados
Para os experimentos FISH em células FFPE, foi utilizado o sonda da HER2 Ventana
em vez do sonda BAC CTD-2019C10 usado para células cultivadas fixas e foi
utilizado o corante orgânico fluoresceína isotiocianato como o rótulo em vez de
Qdot 655.
Discussão
 Seleção de pacientes para terapia:
Negativo Tratamento adequado
Teste deHER2
Positivo
Trastuzumab
 Imprecisão observada na prática clínica e em ensaios clínicos:
• Falta de padrões de referência;
• Falta do uso de calibradores do ensaio.
Acreditasse que os materiais de referência ideais para padrões e calibradores
em testes de HER2 (bem como outros biomarcadores) possam ser as linhas
celulares.
• As linhas de células podem ser cultivadas em vitro;
• Podem ser fixadas e processadas de maneira semelhantes aos das amostras histopatológicas;
• Obtenção de um duradouro banco de material de controle, fornecendo assim a reprodutibilidade e
coerência entre os diferentes ensaios.
• A utilização de materiais com base em células de referência será útil para ambos os teste IHQ e FISH.
contêm aproximadamente
10x mais cópias do gene
ERBB2 e cerca de 15x mais
quantidade da proteína
HER2
SK-BR-3
Sistema de utilização
de 2 linhas de células
MCF-7
Utilizado como controle
devido ao pequeno
número de cópias de
ErbB2 em nestas células.
FISH E IHQ
Caracterização da
produção da proteína
HER2 e a amplificação do
geneERBB2
Conclusões
 Demonstraram que SK-BR-3 e MCF-7 são candidatos
adequados como materiais de referência para o teste
HER2. Acoplado com as plataformas de ensaio
associados, eles fornecem valiosos controles quantitativos
para a medição de amplificação de HER2 no câncer de
mama e de produção nas amostras, independentemente
do anticorpo/ sonda ou detector usado.