construção de um banco de tumor para estudos

Universidade do Vale do Paraíba
Faculdade de Educação e Artes
Ciências Biológicas
Aluna: Carolina Genúncio da Cunha Menezes Costa
Orientadora: Prof.ª Dr.ª Renata de Azevedo Canevari
Co-orientador: Prof. Dr. Leandro José Raniero
INTRODUÇÃO
y Câncer de mama – 2º mais freqüente do mundo e o mais
comum entre as mulheres (INCA, 2010);
y De acordo com o INCA (2010), ≈50.000 novos casos/ano;
y Alta mortalidade no Brasil;
Introdução
Introdução
Risco muito elevado
Risco mediano
Risco pouco elevado
- Mãe ou irmã com câncer de
- Mãe ou irmã com câncer de
- Menstruação precoce (≤ 12
mama na pré-menopausa.
mama na pós-menopausa.
anos).
- Antecedente de hiperplasia
- Nuliparidade.
- Menopausa tardia (≥ 55 anos.
epitelial atípica ou neoplasia
- Antecedente de hiperplasia
- Primeira gestação depois de
lobular in situ.
epitelial sem atipia ou
34 anos.
- Suscetibilidade genética
macrocistos apócrinos.
- Obesidade.
comprovada (mutação do gene
- Dieta gordurosa.
BRCA 1 ou BRCA2).
- Sedentarismo.
- Terapia de reposição
hormonal por mais de 5 anos.
- Ingestão alcoólica excessiva.
Fonte: BARROS et al., 2001
Introdução
y Marcadores prognósticos:
y
Características clínicas e histopatológicas que ajudam a
prever o prognóstico da paciente.
y
Determinação do melhor tratamento.
(ABREU; KOIFMAN, 2002)
Introdução
y Idade da paciente:
y
Câncer hereditário ou esporádico (INCA, 2010).
y Tamanho do tumor:
Constitui a base do estadiamento tumoral TNM (UICC, 2004).
y ↑ tamanho do tumor - ↑ linfonodos acometidos - ↑ recidiva
(ABREU; KOIFMAN, 2002).
y Auxilia na determinação do procedimento cirúrgico e da
terapia (GOLDHIRSCH et al, 2005).
y
Introdução
y Status dos linfonodos:
y
Comprometimento de linfonodos axilares = pior prognóstico
(FANEYTE et al, 2004).
y
Sobrevida: sem linfonodos acometidos (65-80%), com
linfonodos acometidos (25-48%).
y
Marinho et al (2008) – comprometimento dos linfonodos
diretamente relacionado ao tamanho do tumor.
Introdução
y Tipo Histológico:
y Carcinoma
ductal in situ – ductos preenchidos com células
carcinomatosas.
y Carcinoma lobular in situ – lóbulos distendidos e preenchidos por
células redondas e rara atividade mitótica.
y Carcinoma ductal invasivo – relacionado com as células que formam os
ductos mamários com inúmeras variações morfológicas.
y Carcinoma lobular invasivo – inicia nos lóbulos e infiltra nos tecidos
vizinhos.
(AFIP, 2003; OMS, 2003)
Introdução
y Grau histológico (ABREU; KOIFMAN, 2002):
Grau histológico I – células bem diferenciadas.
y Grau histológico II – células pouco diferenciadas.
y Grau histológico III – células indiferenciadas.
y
y Estadiamento tumoral (UICC, 2004):
Sistema TNM: T – tumor; N – linfonodos; M – metástase à
distância.
y Classificação clínica (cTNM) e patológica (pTNM).
y
y História familial:
Introdução
INCA (2010) – 10% dos cânceres são hereditários.
y Parentes com câncer antes dos 50 anos aumenta a chance de
câncer hereditário.
y BRCA-1 e BRCA-2 – genes de predisposição (THOMPSON;
EASTON, 2004).
y
y Presença/ausência de metástase:
A metástase dificulta o tratamento (MORAES et al, 2006).
y Sobrevida – com metástase (50%), sem metástase (90%).
y
Introdução
y Presença/ausência de recidiva:
y
Importante na recomendação do tratamento.
Risco mínimo – seguimento clínico.
y Risco baixo – hormonioterapia (tamoxifeno).
y Risco alto – quimioterapia e/ou radioterapia.
y
(INCA, 2010)
Introdução
y Marcadores moleculares prognósticos (ANDRIOLO, 1996):
Detecção do câncer em estágio precoce;
y Avaliação do tumor;
y Monitoramento da progressão da doença;
y Determinação da resposta à terapia;
y
y
Câncer de mama – ER, PgR, HER-2 e Ki-67.
Introdução
y Receptores hormonais:
2/3 dos cânceres de mama são negativos, sendo 60-81%
para o ER e 44-61% para o PgR.
y Tumores positivos indica um melhor prognóstico e
respondem melhor à terapia hormonal.
y São encontrados em menor quantidade em mulheres pósmenopausa.
y
(STIERER et al, 1993; ELLIOT et al, 1994)
Introdução
y Receptores hormonais:
2/3 dos cânceres de mama são negativos, sendo 60-81%
para o ER e 44-61% para o PgR.
y Tumores positivos indica um melhor prognóstico e
respondem melhor à terapia hormonal.
y São encontrados em menor quantidade em mulheres pósmenopausa.
y
Introdução
y HER-2:
Receptor de fator de crescimento epidermal.
y Amplificação presente em 10-40% dos carcinomas de
mama.
y Amplificação = pior prognóstico; baixa resposta ao
tratamento quimioterápico.
y
(EISENBERG; KOIFMAN, 2001; ALMEIDA et al., 2007)
Introdução
y Ki-67:
Antígeno nuclear de proliferação celular.
y Correlaciona-se à proliferação celular e à síntese de DNA.
y Positividade = baixo grau de diferenciação celular e pior
prognóstico.
y
(JEZIORSKI et al., 2000; MARINHO et al., 2008)
Introdução
y Banco de tumor (CARVALHO et al., 2007):
y
Facilita estudos na área oncológica
Coleta;
y Catalogação;
y Armazenamento;
y Disponibilização das amostras para estudos.
y
OBJETIVOS
y Geral:
y
Dar início a construção de um banco de tecidos com
amostras de tumores mamários primários de diferentes tipos
histológicos, com o intuito de propiciar estudos de análises
de expressão gênica e análises de espectroscopia óptica,
para auxiliar na determinação de um melhor prognóstico e
diagnóstico das pacientes com carcinomas mamários.
Objetivos
y Específicos:
y Obter tecidos frescos de cirurgias de tumores mamários que estejam em
boas condições histopatológicas;
y Obter RNA íntegro e com rendimento alto para que possam ser
utilizados em diferentes técnicas de biologia molecular;
y Propiciar a disponibilização deste banco de tecido a todo o grupo de
pesquisa do LEVB;
y Propiciar futuros estudos de pesquisa básica que possuam enfoque no
diagnóstico e prognóstico das pacientes.
MATERIAL E MÉTODOS
y Comitê de Ética: H67/CEP/2010;
y Colaboração:
y
Dr. Luis Henrique Ferreira de Moraes – Mastologista;
y
Dr. Ricardo Macarenco – Patologista.
Material e Métodos
y Catalogação:
Foi criado um banco de dados exclusivamente para este
banco de tumores;
y O banco de dados contém todas as informações obtidas da
paciente;
y As informações clínicas e histopatológicas foram obtidas no
prontuário da paciente e após exames IHC na Clínica
CIPAX.
y
Material e Métodos
Material e Métodos
y As informações pessoais das pacientes são mantidas em
sigilo, sendo acessíveis somente para pesquisadores que
utilizarão o banco de tumores.
Material e Métodos
y Extração de quantificação do RNA:
Extração e purificação - protocolo Rneasy Mini Kit
(QiagenTM);
y Quantificação - NanoDrop (ND-1000 Spectrophotometer
v.3.0.1, Labtrade);
y Qualidade - eletroforese em gel de agarose.
y
Material e Métodos
Material e Métodos
RESULTADOS
y Foram coletadas amostras provenientes de 6 pacientes.
y As informações clínicas e histopatológicas coletadas
incluíram idade, grau de diferenciação tumoral,
estadiamento tumoral, história de câncer familial,
recorrência, presença ou ausência de metástases e estado
atual da paciente.
Resultados
y Idades – 27 e 58 anos.
y 5 amostras – Hospital São
Francisco de Assis.
y1
amostra
–
Hospital
Antoninho da Rocha Marmo.
Resultados
Procedimentos cirúrgicos realizados
N
%
Mastectomia simples
2
33
Mastectomia radical modificada
4
67
y O tipo histológico diagnosticado em 100% dos casos foi o
carcinoma ductal invasivo.
Resultados
Tratamentos realizados nas pacientes
N
%
Quimioterapia neoadjuvante
3
50
Quimioterapia adjuvante
-
-
Radioterapia
-
-
Hormonioterapia
-
-
Nenhum
3
50
Resultados
Classificação dos tumores (pTNM)
N
%
pT1c
1
17
pT2
2
33
pT3
2
33
Nenhum
1
17
y pT1c (tamanho do tumor >1,0 e < 2,0 cm);
y pT2 (tamanho tumor > 2 cm e ≤ 5 cm);
y pT3 (tamanho tumor > 5 cm).
Resultados
Classificação dos tumores (pTNM)
N
%
pN0
2
33
pN1mi
1
17
pN1a
1
17
pN3a
2
33
y pN0 (ausência de metástase nos linfonodos);
y pN1mi (micrometástase > 0,2 e < 2,0 mm);
y pN1a (metástase de 1-3 linfonodos axilares);
y pN3a (metástase em ≥ 10 linfonodos axilares).
Resultados
Resultados
y “Adjuvant Online!”
y Idade;
y Tamanho do tumor;
y Grau histológico;
y Linfonodos axilares acometidos;
y Expressão do ER.
Prognósticos
N
%
Mau prognóstico
4
67
Bom prognóstico
2
33
Resultados
DISCUSSÃO
y Um grande número de estudos genéticos e moleculares tem sido realizado
com o intuito de compreender o significado dos marcadores moleculares
conhecidos e descobrir novos marcadores genéticos (GIANCOTTI, 2006).
y Um dos primeiros passos para o estudo destes tumores, é a construção de
um banco de tumor que contenha amostras tumorais em boas condições de
uso e um banco de dados com as informações clínicas e histopatológicas das
pacientes (GOLDHIRSCH et al., 2005; KATAJA; CASTIGLIONE, 2009).
y O caso 1 - 27 anos e todas as características de um câncer muito agressivo.
INCA (2010) - pacientes mais jovens costumam a ser acometidas por câncer
de mama hereditário, porém neste caso a paciente não tem casos conhecidos
na família.
Discussão
y Caso 1 – não respondeu a quimioterapia neoadjuvante. Kataja e Castiglione
(2009) citam que isto pode ocorrer em casos de câncer muito agressivos,
onde o único procedimento cirúrgico a ser utilizado é a mastectomia.
y O caso 2 - tumor de tamanho relativamente grande e linfonodos acometidos.
Goldhirsch et al (2005) - paciente do grupo de risco médio de recidiva, que
foi o que a paciente apresentou quando se utilizou o programa “Adjuvant
Online!”.
y Caso 3 - carcinoma ductal invasivo com características de pior prognóstico
e que sofreu quimioterapia neoadjuvante. A mastectomia radical foi o
procedimento realizado para minimizar ao máximo a chance de recidiva.
Discussão
y Caso 4 - mastectomia simples, mesmo com uma micrometástase
diagnosticada. A micrometástase não foi significativa para que houvesse
esvaziamento axilar.
y Caso 5 - câncer com grande quantidade dos linfonodos acometidos,
indicando um pior prognóstico e se encaixando na categoria de alto risco de
acordo com Barros et al (2001), Abreu e Koifman (2002), Faneyete et al
(2004), Goldhirsch et al (2005) e Marinho et al (2008).
y Caso 6 - quimioterapia neoadjuvante com redução tumoral e nenhum
linfonodo acometido. Devido ao câncer ser muito agressivo e visando
eliminar ao máximo a chance de recidiva.
Discussão
y Chu et al. (2002) e Jewell et al. (2002) - RNA de boa qualidade →
armazenadas em nitrogênio líquido ou em freezer -80°C.
y Nossos resultados estão de acordo com INCA (2010) que diz que ainda são
raros casos de câncer que se devem exclusivamente a fatores hereditários.
y OMS (2003) e INCA (2010) - carcinoma ductal invasivo → tipo histológico
mais diagnosticado e o mais agressivo.
y Barros et al.(2001) - mastectomia é o procedimento cirúrgico que de
maneira geral é evitado, dando preferência à cirurgia conservativa.
Discussão
y Goldhirsch et al (2005) e Kataja e Castiglione (2009) - a quimioterapia
neoadjuvante → pacientes com câncer de mama muito agressivo.
y Barros et al. (2001), Abreu e Koifman (2002), Goldhirsch et al. (2005) e
Marinho et al. (2008) - tamanho do tumor → número de linfonodos
acometidos → prognóstico.
y Jeziorski et al (2000), Eisenberg e Koifman (2001), Almeida et al (2007) e
Marinho et al (2008) - ER e PgR negativos e HER-2 e Ki-67 positivos →
pior prognóstico.
y van de Vijver et al (2002), van´t Veer et al (2002), Knauner et al (2010) e
Mook et al (2010) – análises em microarray.
CONCLUSÃO
y Foram obtidos
histopatológica;
tecidos
frescos
e
de
boa
qualidade
y Foram obtidos RNAs íntegros e de bom rendimento e pureza
para serem utilizados em estudos de biologia molecular;
y Foram obtidos os dados pessoais, clinicopatológicos e
moleculares das pacientes e das amostras de carcinomas
mamários as quais foram armazenados em um banco de dados
e serão disponibilizadas para estudos na área de biologia
molecular e espectroscopia óptica.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
y BARROS, A.C.S.D.; BARBOSA, E.M.; GEBRIM, L.H. Diagnóstico e tratamento do
câncer de mama. Projeto Diretrizes AMB CFM.
y
y
CARVALHO, L.; BERNARDO, M.T.; TAVARES, M.; COTOVIO, P.; MAÇÃO, P.; OLIVEIRA, C.
Banco de tumores: Imperativo na medicina. Acta Med. Port., v.20, p.325-333, 2007.
EISENBERG, A.L.A.; KOIFMAN, S. Câncer de mama: marcadores tumorais. Revista Brasileira
de Cancerologia, v.47, p.377-388, 2001.
y Instituto Nacional de Câncer, 2010. Disponível em: www.inca.gov.br. Acesso em: 27
mar. 2010.
y JEZIORSKI, A.; BLONSKI, J.Z.; NIEWIADOMSKA, H. The expression of
products of oncogens c-erbB2 and EGFR and proliferating antigens Ki67 and
PCNA in primary invasive ductal cancer of female breast. J. Exp. Clin. Cancer
Res., v.19, p.61-67, 2000.
y MARINHO, V.F.Z.; METZE, K.; SANCHES, F.S.F.; ROCHA, G.F.S.; GOBBI, H.
Marcadores moleculares em câncer de mama preditivos de metástases axilares.
Rev. Assoc. Med. Bras., v.54, p.203-207, 2008.
y ONDA, M.; EMI, M.; NAGAI, H.; NAGAHATA, T.; TSUMAGARI, K.; FUJIMOTO,
T.; AKIYAMA, F.; SAKAMOTO, G.; MAKITA, M.; KASUMI, F.; MIKI, Y.;
TANAKA, T.; TSUMODA, T.; NAKAMURA, Y. Gene expression patterns as marker
for 5-year postoperative prognosis of primary breast cancers. J Cancer Res Clin
Oncol, v.130, p.537-545, 2004.
OBRIGADA!!!