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Ciências Biológicas
ESTUDO DA LOCALIZAÇÃO INTRACELULAR DE PLASMÍDIOS LIPOFECTADOS EM CÉLULAS
HUMANAS. Lindolfo da Silva Meirelles, José Artur Bogo Chies, Nance Beyer Nardi (Laboratório de
Imunogenética, Departamento de Genética, Instituto de Biociências, UFRGS).
Pouco se sabe sobre o mecanismo de entrada na célula e posterior localização intracelular de construtos genéticos utilizados em
vacinas de DNA. Este trabalho visa a analisar a localização intracelular de um plasmídio quando este é introduzido em uma
célula, investigando a hipótese de localização na mitocôndria. Para isso, a linhagem celular imortal CCRF-CEM foi mantida em
cultura e transfectada com o plasmídio pEGFP-N1, que codifica a proteína EGFP e confere resistência ao antibiótico neomicina,
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utilizando-se para isso um lipídio catiônico. As células transfectadas estão sendo selecionadas adicionando-se antibiótico ao meio
de cultura. As mesmas serão ainda coletadas e rompidas com ultra-som, para que se possam isolar por centrifugação as frações
nuclear e mitocondrial. De posse destas, os DNAs nuclear e mitocondrial serão extraídos e a presença ou ausência do plasmídio
nas duas frações será verificada por meio de PCR, usando-se primers para uma seqüência de DNA do plasmídio (teste), uma
seqüência de DNA nuclear e uma seqüência de DNA mitocondrial (controles). Os resultados nos possibilitarão verificar se o
plasmídio transfectado está localizado no núcleo, na mitocôndria, ou mesmo em ambos. Até o momento já foi estabelecida uma
metodologia para o isolamento das frações celulares nuclear e mitocondrial, bem como para o isolamento de DNA dessas frações.
A técnica de PCR já foi estabelecida para a amplificação das seqüências de DNA controle, e nesta ocasião verificou-se que a
linhagem celular utilizada não possui ao menos uma porção do gene codificante do fator de coagulação V. A ocorrência da
transfecção e a eficácia do processo de seleção das células transfectadas foram comprovadas por análise da fluorescência celular,
decorrente da expressão de EGFP, em microscópio de fluorescência e em citômetro de fluxo. (CNPq-PIBIC/UFRGS, FINEP).
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